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（1）进入手术室必须更换洗手衣裤、鞋帽。（2）严格控制入室人数。（3）尽量减少层流手术室的开门次数与时间（更不可将门打开不关），维持'相对密闭状态'，以防外来污染的进入。（4）手术前用酒精擦拭室内物品、程仪器、设备等。（5）术后及时、彻底清洁室内所有物品、墙壁及地面。（6）妇女不可用粉、头发喷雾剂和指甲油之类的化妆品，以减少污染来源。
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工作服应选用不易产生静电、不易脱落纤维的涤纶和尼龙织物。定期检测层流系统功能状态，测试层流手术室环境空气洁净度指标和细菌培养等。总之，使用层流手术室，强化无菌观念和正规化管理仍然是程安全的根本保证与要求，仍然是手术室工作之根本、之重点，只有当两者紧密结合起来才是趋于的。
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按手术有菌或无菌的程度，手术间可划分成以下5类：(1)Ⅰ类手术间：即无菌净化手术间，主要接受颅脑、心脏、脏器移植等手术。(2)Ⅱ类手术间：即无菌手术间，主要接受脾切除手术、闭合性切开复位术、眼内手术、甲状腺切除术等无菌手术。(3)Ⅲ类手术间：既有菌手术间，接受胃、胆囊、肝、阑尾、、肺等部位的手术。
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